## Repaso Fabi Tesis
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#### Acción tinción hematoxilina eosina
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Obtenido de (Fischer et al., 2008) [Fischer-PubMed](https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21356829/#:~:text=Hematoxylin%20has%20a%20deep%20blue,varying%20degrees%20of%20pink%20staining.)

La tinción no ha cambiado durante muchos años porque funciona bien con una variedad de fijadores y muestra una amplia gama de características de matriz extracelular, nuclear y citoplasmática.
- La *hematoxilina tiene un color azul-púrpura intenso* y **tiñe los ácidos nucleicos** mediante una reacción compleja que no se comprende del todo. Si hay abundantes polirribosomas, el citoplasma tendrá un tono azul claro.
> **Limitación**: *Una limitación de la tinción con hematoxilina es que es incompatible con la inmunofluorescencia. Sin embargo, es útil teñir una sección de parafina en serie de un tejido en el que se realizará la inmunofluorescencia.*

> **Utilidad**Hematoxilina, generalmente sin eosina, es útil como contratinción para muchos procedimientos inmunohistoquímicos o de hibridación que utilizan sustratos colorimétricos (como la fosfatasa alcalina o la peroxidasa). Este protocolo describe la tinción H&E de secciones de tejidos y células.

- La *eosina es de color rosa* y **tiñe las proteínas de forma inespecífica**. Tinción de nucleolos con eosina.

En un tejido típico, **los núcleos se tiñen de azul, mientras que el citoplasma y la matriz extracelular tienen diversos grados de tinción rosa.** Las células bien fijadas muestran un detalle intranuclear considerable. Los núcleos muestran patrones variables de condensación de heterocromatina (tinción con hematoxilina) específicos del tipo de célula y del tipo de cáncer que son muy importantes desde el punto de vista diagnóstico. La zona de Golgi puede identificarse tentativamente por la ausencia de tinción en una región próxima al núcleo. Así, la mancha revela abundante información estructural, con implicaciones funcionales específicas.

#### Termogenesis, uso de ácidos grasos de la lipolisis
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##### Termogenesis def:
La **termogénesis** (del griego: _termo_ temperatura _génesis_ inicio) es la capacidad de generar [calor](https://es.wikipedia.org/wiki/Calor "Calor") en el organismo debido a las reacciones [metabólicas](https://es.wikipedia.org/wiki/Metabolismo "Metabolismo"). La disipación de calor equilibra esta generación interna dando lugar a una [homeostasis](https://es.wikipedia.org/wiki/Homeostasis "Homeostasis") térmica ([equilibrio térmico](https://es.wikipedia.org/wiki/Equilibrio_t%C3%A9rmico "Equilibrio térmico")) en las [célula](https://es.wikipedia.org/wiki/C%C3%A9lula "Célula") que en los [mamífero](https://es.wikipedia.org/wiki/Mam%C3%ADfero "Mamífero") como el ser humano alcanza un valor estático de aproximadamente 37 °C. La termogénesis puede ser inducida por la [dieta](https://es.wikipedia.org/wiki/Dieta "Dieta") (ingesta de alimentos con capacidad de termogénesis) o por la inclusión de [suplementos dietéticos](https://es.wikipedia.org/wiki/Suplementos_diet%C3%A9ticos "Suplementos dietéticos") termogénicos.[1](https://es.wikipedia.org/wiki/Termog%C3%A9nesis#cite_note-Bender-1)​ A veces se define la termogénesis como el residuo degradado de la energía generada en el [metabolismo basal](https://es.wikipedia.org/wiki/Metabolismo_basal "Metabolismo basal"). La termogénesis explica la activación del calor típica de los mamíferos.

El tejido adiposo pardo tiene una [proteína desacopladora](https://en.wikipedia.org/wiki/Uncoupling_protein "Proteína de desacoplamiento") única ( [termogenina](https://en.wikipedia.org/wiki/Thermogenin "termogenina") , también conocida como proteína desacopladora 1) que permite el desacoplamiento de protones ( [H +](https://en.wikipedia.org/wiki/Hydron_(chemistry) "Hidrónico (química)") ) moviéndose hacia abajo por su gradiente mitocondrial desde la síntesis de ATP, lo que permite que la energía se disipe como calor. [[6]](https://en.wikipedia.org/wiki/Thermogenesis#cite_note-6)

En este proceso, sustancias como los [ácidos grasos libres](https://en.wikipedia.org/wiki/Fatty_acids "Ácidos grasos") (derivados de los [triacilgliceroles](https://en.wikipedia.org/wiki/Triacylglycerol "triacilglicerol") ) eliminan la inhibición de la termogenina por parte de las [purinas](https://en.wikipedia.org/wiki/Purine "purina") (ADP, GDP y otros), lo que provoca una entrada de H + en la matriz de la [mitocondria](https://en.wikipedia.org/wiki/Mitochondrion "mitocondria") y evita el canal de la [ATP sintasa .](https://en.wikipedia.org/wiki/ATP_synthase "ATP sintasa") Esto desacopla la [fosforilación oxidativa](https://en.wikipedia.org/wiki/Oxidative_phosphorylation "Fosforilación oxidativa") y la energía de la [fuerza motriz del protón](https://en.wikipedia.org/wiki/Proton_motive_force "fuerza motriz de protones") se disipa como calor en lugar de producir ATP a partir de ADP, que almacenaría energía química para el uso del cuerpo. La termogénesis también puede producirse por fuga de la bomba de [sodio-potasio](https://en.wikipedia.org/wiki/Na%2B/K%2B-ATPase "Na+/K+-ATPasa") y de la bomba de Ca 2+ . [[7]](https://en.wikipedia.org/wiki/Thermogenesis#cite_note-7)La termogénesis se ve favorecida por [ciclos fútiles](https://en.wikipedia.org/wiki/Futile_cycle "Ciclo inútil") , como la aparición simultánea de [lipogénesis](https://en.wikipedia.org/wiki/Lipogenesis "lipogénesis") y [lipólisis](https://en.wikipedia.org/wiki/Lipolysis "Lipólisis") [[8]](https://en.wikipedia.org/wiki/Thermogenesis#cite_note-8) o [glucólisis](https://en.wikipedia.org/wiki/Glycolysis "glucólisis") y [gluconeogénesis](https://en.wikipedia.org/wiki/Gluconeogenesis "Gluconeogénesis") . En un contexto más amplio, los ciclos fútiles pueden verse influenciados por ciclos de actividad/descanso como el [ciclo Summermatter](https://en.wikipedia.org/wiki/Summermatter_cycle "Ciclo de materia de verano") . [[9]](https://en.wikipedia.org/wiki/Thermogenesis#cite_note-9)

[La acetilcolina](https://en.wikipedia.org/wiki/Acetylcholine "acetilcolina") estimula el músculo para aumentar [la tasa metabólica](https://en.wikipedia.org/wiki/Basal_metabolic_rate "Tasa metabólica basal") . [[10]](https://en.wikipedia.org/wiki/Thermogenesis#cite_note-pmid25976513-10)

Las bajas exigencias de la termogénesis significan que los ácidos grasos libres recurren, en su mayor parte, a la [lipólisis](https://en.wikipedia.org/wiki/Lipolysis "Lipólisis") como método de producción de energía.

Se ha recopilado una lista completa de genes humanos y de ratón que regulan la termogénesis inducida por frío (CIT) en animales vivos ( _[in vivo](https://en.wikipedia.org/wiki/In_vivo "En vivo")_ ) o muestras de tejido ( _[ex vivo](https://en.wikipedia.org/wiki/Ex_vivo "Ex-vivo")_ ) [[11]](https://en.wikipedia.org/wiki/Thermogenesis#cite_note-11) y está disponible en CITGeneDB. [[12]](https://en.wikipedia.org/wiki/Thermogenesis#cite_note-12)

#### Lipolisis y kit de glicerol
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##### Lipolisis:

La **lipolisis** o **lipólisis** es el proceso [catabólico](https://es.wikipedia.org/wiki/Catabolismo "Catabolismo") que permite la movilización de [lípidos](https://es.wikipedia.org/wiki/L%C3%ADpido "Lípido") que constituyen la reserva de combustible en el [tejido adiposo](https://es.wikipedia.org/wiki/Tejido_adiposo "Tejido adiposo") hacia los tejidos periféricos para cubrir las [necesidades energéticas](https://es.wikipedia.org/wiki/Bioenerg%C3%A9tica_(biolog%C3%ADa) "Bioenergética (biología)") del organismo. Los lípidos se fragmentan para obtener ácidos grasos. Mediante la lipólisis los [triglicéridos](https://es.wikipedia.org/wiki/Triglic%C3%A9ridos "Triglicéridos") son [hidrolizados](https://es.wikipedia.org/wiki/Hidr%C3%B3lisis "Hidrólisis") liberando [ácidos grasos](https://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_graso "Ácido graso") y [glicerol](https://es.wikipedia.org/wiki/Glicerol "Glicerol").[1](https://es.wikipedia.org/wiki/Lipolisis#cite_note-Saponaro2015-1)​[2](https://es.wikipedia.org/wiki/Lipolisis#cite_note-Bolsoni2015-2)​[3](https://es.wikipedia.org/wiki/Lipolisis#cite_note-Young2013-3)​

Los triglicéridos son hidrolizados a [diacilglicerol](https://es.wikipedia.org/wiki/Diacilglicerol "Diacilglicerol") y una molécula de [ácido graso](https://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_graso "Ácido graso"), luego el diacilglicerol se convierte en [monacilglicerol](https://es.wikipedia.org/wiki/Monoglic%C3%A9rido "Monoglicérido") y otro ácido graso; finalmente, el monoacilglicerol se hidroliza a [glicerol](https://es.wikipedia.org/wiki/Glicerol "Glicerol") y un tercer ácido graso. Estas reacciones [bioquímicas](https://es.wikipedia.org/wiki/Bioqu%C3%ADmica "Bioquímica") son inversas a lo [lipogénesis](https://es.wikipedia.org/wiki/Lipog%C3%A9nesis "Lipogénesis"). A la lipolisis también se le llama movilización de las grasas.[1](https://es.wikipedia.org/wiki/Lipolisis#cite_note-Saponaro2015-1)​

La lipolisis es estimulada por diferentes [hormonas](https://es.wikipedia.org/wiki/Hormona "Hormona") catabólicas como el [glucagón](https://es.wikipedia.org/wiki/Glucag%C3%B3n "Glucagón"), la [epinefrina](https://es.wikipedia.org/wiki/Epinefrina "Epinefrina"), la [norepinefrina](https://es.wikipedia.org/wiki/Norepinefrina "Norepinefrina"), la [hormona del crecimiento](https://es.wikipedia.org/wiki/Hormona_del_crecimiento "Hormona del crecimiento") y el [cortisol](https://es.wikipedia.org/wiki/Cortisol "Cortisol"), a través de un sistema de [transducción de señales](https://es.wikipedia.org/wiki/Transducci%C3%B3n_de_se%C3%B1al "Transducción de señal"). La [insulina](https://es.wikipedia.org/wiki/Insulina "Insulina") disminuye la lipolisis.

En el [adipocito](https://es.wikipedia.org/wiki/Adipocito "Adipocito") el glucagón activa a determinadas [proteínas G](https://es.wikipedia.org/wiki/Prote%C3%ADna_G "Proteína G"), que a su vez activan a la [adenilato ciclasa](https://es.wikipedia.org/wiki/Adenilato_ciclasa "Adenilato ciclasa"), al [AMPc](https://es.wikipedia.org/wiki/AMPc "AMPc") y este a la lipasa sensitiva, [enzima](https://es.wikipedia.org/wiki/Enzima "Enzima") que hidroliza los triacilglicéridos. Los ácidos grasos son vertidos al torrente sanguíneo y dentro de las células se degradan a través de la betaoxidación en [acetil-CoA](https://es.wikipedia.org/wiki/Acetil-CoA "Acetil-CoA") que alimenta el [ciclo de Krebs](https://es.wikipedia.org/wiki/Ciclo_de_Krebs "Ciclo de Krebs"), y favorece la formación de cuerpos cetónicos.

En última instancia, los productos finales de la lipolisis son agua, gas carbónico y energía, según el esquema -muy simplificado: C55 H104 O6 + 78 O2 → 55 CO2 + 52 H2O + energía.[4](https://es.wikipedia.org/wiki/Lipolisis#cite_note-4)​

##### Kit Glicerol

La lipólisis es el proceso de hidrólisis de los triglicéridos en ácidos grasos libres y glicerol. En este proceso intervienen la lipasa adiposa TG (ATGL), la lipasa sensible a las hormonas (HSL) y la lipasa de monoglicéridos. La lipólisis mantiene el equilibrio energético durante el ayuno y el ejercicio proporcionando un sustrato para el metabolismo oxidativo. La lipólisis está regulada por factores nutricionales y hormonas. Los problemas de regulación de la lipólisis se asocian a la obesidad, la diabetes y los síndromes metabólicos.

Idoneidad
Adecuado para la medición de la lipólisis en 3T3-L1 y adipocitos.

Principio
**El kit de ensayo colorimétrico de lipólisis (3T3-L1) contiene una catecolamina sintética (isoproterenol) que activa los receptores β-adrenérgicos. Esto activa la adenilato ciclasa, convirtiendo el ATP en AMPc. El AMPc activa entonces la hidrólisis de los triglicéridos por la lipasa sensible a las hormonas. La lipólisis se determina midiendo un producto colorimétrico con absorbancia a 570 nm (A570) proporcional a la cantidad de glicerol presente**.

==Kit medición de glicerol libre (Sigma-Aldrich).==
Para la determinación de glicerol del sobrenadante del tejido adiposo tratado con noradrenalina se utilizó el “kit de determinación de glicerol libre” de SIGMA, este permite la detección de glicerol por un método colorimétrico. Se preparó el reactivo para determinación de glicerol (SIGMA FG0100) de acuerdo con las indicaciones de fábrica. Luego se prepararon 3 mezclas correspondientes a blanco, estándar y muestra con 200 μL de medio de cultivo, 10 μL de estándar de glicerol (SIGMA G7793), y 200 μL de las muestras respectivamente, en cubetas etiquetadas de acuerdo con el contenido. Se agregó a cada cubeta 400 μL de reactivo, se mezcló por inversión y luego se dejó incubar por 5 minutos a 37ºC, 30 minutos a temperatura ambiente, o 10 minutos a 30ºC. Se midió la absorbancia utilizando agua como línea de base a una longitud de onda de 540 nm para blanco, estándar y muestras, registrando estas mediciones

#### Envejecimiento del tejido adiposo
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[White adipose tissue dysfunction in obesity and aging - PubMed](https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34364887/)

Tanto la obesidad como el envejecimiento están asociados con el desarrollo de enfermedades metabólicas como la diabetes tipo 2 y las enfermedades cardiovasculares. La inflamación crónica de bajo grado del tejido adiposo es uno de los mecanismos implicados en la progresión de estas enfermedades. La obesidad y el envejecimiento desencadenan alteraciones del tejido adiposo que finalmente conducen a un fenotipo proinflamatorio de las células inmunes residentes en el tejido adiposo. La obesidad y el envejecimiento también comparten otras características, como una mayor proporción de tejido adiposo visceral frente a subcutáneo y una menor esperanza de vida. Aquí revisamos las características comunes de la obesidad y el envejecimiento y las alteraciones en el tejido adiposo blanco y las células inmunitarias residentes. Nos centramos en las alteraciones metabólicas del tejido adiposo en la obesidad y el envejecimiento, como la inflamación y la remodelación del tejido adiposo.

5. Conclusiones y perspectivas

Tanto la obesidad como el envejecimiento se asocian a un aumento paralelo de enfermedades metabólicas crónicas. El envejecimiento favorece la redistribución del TA de la del SAT al IVA, y en la obesidad la acumulación de IVA se asocia a un empeoramiento del metabolismo de la glucosa. El VAT contiene adipocitos más grandes que el SAT. Así pues, la adiposidad visceral se asocia a la inflamación crónica del TAV, que contribuye al desarrollo de enfermedades cardiovasculares, T2D y otras comorbilidades que suelen asociarse a la obesidad [30,36,37,39,40,42,43]. Además, el aumento de la fibrosis del TA en sujetos viejos y obesos modifica el metabolismo lipídico de la TA y favorece la RI. Es importante destacar que el perfil de las células inmunitarias infiltradas en el TA es una El perfil de las células inmunitarias infiltradas en el TA es una de las principales características del fenotipo proinflamatorio observado tanto en la obesidad como en la obesidad, y una estrategia terapéutica interesante sería inducir la reprogramación de fenotipos reguladores en las células residentes B y T-WAT. Se necesitan estudios de intervención in vitro e in vivo en humanos y modelos animales para investigar más a fondo las estrategias terapéuticas que promueven cambios en la distribución de las WAT o la reprogramación de las células inmunitarias hacia un fenotipo antiinflamatorio. Esto podría mejorar el metabolismo de la glucosa de la glucosa en la obesidad y los ancianos, proporcionando así una estrategia novedosa para luchar contra la inflamación crónica de bajo grado en sujetos obesos y envejecidos.

En esta revisión hemos resumido los datos actuales sobre los mecanismos mecanismos celulares y moleculares comunes de la obesidad y la inflamación del TA relacionada con la edad inflamación del TAO relacionada con la edad y su papel en el metabolismo de la glucosa y en la resistencia a la insulina. La inflamación crónica de bajo grado del TAO provoca comorbilidades relacionadas con la obesidad y el envejecimiento y reduce la esperanza de vida [6,139,142-144].
Por tanto, un reto clave será identificar estrategias de intervención capaces de reducir el tamaño de los adipocitos, la acumulación de IVA y la inflamación del TAE y modular el papel de las poblaciones inmunitarias infiltradas por el TA. En este
En este contexto, será importante estudiar los mecanismos implicados en el tamaño de los adipocitos y la expansión del IVA. Las herramientas capaces de inhibir el aumento del del IVA serían un tratamiento eficaz para prevenir el desarrollo de
enfermedades asociadas a la obesidad y al envejecimiento y para aumentar la esperanza de vida. Los preadipocitos se encuentran dentro del tejido adiposo y su capacidad proliferativa está asociada al estado metabólico. Por ello, las estrategias centradas en aumentar la tasa de adipogénesis del IVA podrían ayudar a cambiar la distribución del depósito de grasa corporal y mejorar el estado metabólico.

Otro punto de interés son las poblaciones de células inmunitarias infiltradas en el TAE. En este contexto, las terapias de reprogramación celular que favorecen los fenotipos reguladores y antiinflamatorios podrían ser una estrategia terapéutica
terapéutica para modular las respuestas inmunitarias y reducir las enfermedades metabólicas asociadas a la obesidad y el envejecimiento. Actualmente existen varios estudios in vitro estudios in vitro e in vivo en los que se está utilizando la reprogramación de las células inmunitarias como tratamiento contra las enfermedades autoinmunes y el cáncer [183-185].
Sin embargo, no hay pruebas sobre la reprogramación de las células inmunitarias residentes en el TA hacia un fenotipo antiinflamatorio. Por este motivo, será importante Por esta razón, será importante determinar si las intervenciones metabólicas que conducen a la pérdida de peso contribuyen a la reprogramación. de peso contribuyen a la reprogramación de las células inmunitarias infiltradas en el TA inmunitarias infiltradas en el TAO o si la reprogramación de las células inmunitarias pérdida de peso y mejorar el estado metabólico en la obesidad y el envejecimiento.

[Tejido adiposo, dieta y envejecimiento - PubMed](https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24321378/)

El aumento relacionado con la edad en la masa grasa corporal, el tejido adiposo visceral (TA) y la deposición de grasa ectópica están fuertemente relacionados con peores condiciones de salud en los ancianos. Además, con el envejecimiento se puede observar una mayor inflamación en el tejido adiposo y puede contribuir a la inflamación. El envejecimiento puede afectar significativamente la función de AT al modificar el perfil de adipocinas producidas por las células adiposas, reducir el número de preadipocitos y su función y aumentar la infiltración de macrófagos de AT. Los eventos iniciadores de la cascada inflamatoria que promueven un mayor perfil inflamatorio de AT no se conocen por completo. Los nutrientes pueden determinar cambios en la cantidad de grasa corporal, en su distribución así como en la función de la AT, mostrando algunos nutrientes un efecto proinflamatorio en la AT. Las evidencias son escasas y bastante controvertidas, con solo unos pocos estudios realizados en sujetos mayores. Los diferentes patrones dietéticos son el resultado de la compleja interacción de alimentos y nutrientes, por lo que se necesitan más estudios para evaluar la asociación entre los patrones dietéticos y los cambios en la estructura, distribución y función del tejido adiposo en los ancianos.

[Aging and adipose tissue: potential interventions for diabetes and regenerative medicine - PubMed](https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26924669/)

La disfunción del tejido adiposo ocurre con el envejecimiento y tiene efectos sistémicos, que incluyen resistencia periférica a la insulina, depósito ectópico de lípidos e inflamación. Los mecanismos fundamentales del envejecimiento, incluida la senescencia celular y la disfunción de las células progenitoras, ocurren en el tejido adiposo con el envejecimiento y pueden servir como objetivos terapéuticos potenciales en enfermedades relacionadas con la edad. En esta revisión, examinamos el papel del tejido adiposo en individuos sanos y exploramos cómo el envejecimiento conduce a la disfunción, redistribución y cambios en la regulación génica del tejido adiposo. El tejido adiposo juega un papel central en la longevidad, y las intervenciones restringidas al tejido adiposo pueden afectar la vida útil. Por el contrario, la obesidad puede representar un estado de envejecimiento acelerado. Discutimos el potencial terapéutico potencial de atacar los mecanismos básicos del envejecimiento, incluida la senescencia celular, en el tejido adiposo, tomando como ejemplos la diabetes tipo II y la medicina regenerativa. Argumentamos que el envejecimiento no debe descuidarse en el estudio de las células madre derivadas del tejido adiposo para las estrategias de medicina regenerativa, ya que los pacientes de edad avanzada constituyen una gran parte de las personas que necesitan tales terapias.

#### Cantidad de energía aportada por grasas vs carbohidratos o proteínas.
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[Calories: Total Macronutrient Intake, Energy Expenditure, and Net Energy Stores - Diet and Health - NCBI Bookshelf](https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK218769/)

En general, los carbohidratos y las grasas se oxidan completamente en el cuerpo. Por el contrario, la proteína solo se oxida parcialmente, lo que da como resultado la excreción de urea y otros productos nitrogenados. **==La oxidación de 1 g de carbohidrato dietético y 1 g de proteína dietética (que se oxida a urea) producen aproximadamente **4 kcal**,==** mientras que la oxidación de 1 g de alcohol produce aproximadamente 7 kcal y la oxidación de 1 g de **==grasa dietética produce aproximadamente 9 kcal.==**

#### Tinción para adipocitos café, marcadores de adipocitos café y blancos.
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[Pathology Outlines - Histology-brown and white adipose](https://www.pathologyoutlines.com/topic/softtissueadiposewhitefat.html)

Positive stains

- Brown adipose tissue
- [S100](https://www.pathologyoutlines.com/topic/stainss100.html)
- [CD31](https://www.pathologyoutlines.com/topic/cdmarkerscd31.html) ([Arch Pathol Lab Med 2006;130:480](https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16594742)
- Also mitochondrial membrane **uncoupling protein** ([J Histochem Cytochem 1993;41:759](https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8468458))
- White adipose tissue
- [Vimentin](https://www.pathologyoutlines.com/topic/stainsvimentin.html) (nonspecific), [S100](https://www.pathologyoutlines.com/topic/stainss100.html) (primarily for mature adipocytes), [calretinin](https://www.pathologyoutlines.com/topic/stainscalretinin.html) (also stains [lipoma](https://www.pathologyoutlines.com/topic/softtissueadiposelipoma.html) and [liposarcoma](https://www.pathologyoutlines.com/topic/softtissuewdliposarcoma.html)) ([Hum Pathol 2006;37:312](https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16613326))
- [Oil red O](https://www.pathologyoutlines.com/topic/stainsoilredo.html) and [Sudan black](https://www.pathologyoutlines.com/topic/stainssudanblackb.html) stain neutral fat (must use frozen tissue because tissue processing removes fat)
- [Oil red O](https://www.pathologyoutlines.com/topic/stainsoilredo.html) also stains most carcinomas
- **Nile blue sulfate** stains neutral fat pink-red and stains fatty acids / phospholipids blue

Negative stains

- Brown adipose tissue
- [Keratin](https://www.pathologyoutlines.com/topic/stainsck7.html), [desmin](https://www.pathologyoutlines.com/topic/stainsdesmin.html), [muscle specific actin](https://www.pathologyoutlines.com/topic/stainsactinmusclespecific.html)
- White adipose tissue
- [CD31](https://www.pathologyoutlines.com/topic/cdmarkerscd31.html), [keratin](https://www.pathologyoutlines.com/topic/stainsck7.html), [desmin](https://www.pathologyoutlines.com/topic/stainsdesmin.html), [muscle specific actin](https://www.pathologyoutlines.com/topic/stainsactinmusclespecific.html)
- References: [Young: Wheater's Functional Histology, 6th Edition, 2013](https://www.amazon.com/exec/obidos/ASIN/0702047473/pathologyoutl-20), [Mills: Histology for Pathologists, 3rd Edition, 2007](https://www.amazon.com/exec/obidos/ASIN/B008UB4NEK/pathologyoutl-20)

El cultivo de células de adipocitos es una herramienta importante para los estudios mecanísticos del metabolismo energético. Muchos factores afectan la diferenciación de los adipocitos en cultivo. La tinción con aceite rojo O se puede utilizar para evaluar el grado de diferenciación. Sin embargo, aún no se ha establecido la validez de este método para el análisis cuantitativo. Aquí mostramos que un protocolo con parámetros elegidos arbitrariamente no mide en el rango lineal y no es adecuado para el análisis cuantitativo (R 2= 0,077, p = 0,382), y desarrolle y valide un protocolo optimizado para la tinción cuantitativa con aceite rojo O de adipocitos cultivados. Los preadipocitos y adipocitos 3T3-L1 se fijan con formaldehído al 4 % y se tiñen con una solución de aceite rojo O al 0,2 % en 2-propanol al 40 % durante 30 minutos. El colorante se eluye con 2-propanol y la absorción del eluato se mide fotométricamente a 510 nm. Este protocolo optimizado logra una excelente correlación entre las cantidades definidas de adipocitos diferenciados en placas de cultivo de tamaño constante y la absorción fotométrica (R 2 = 0,972, p = 6,585E-14). El rendimiento del método es independiente de las placas de cultivo utilizadas. Por lo tanto, el protocolo optimizado de tinción con aceite rojo O puede emplearse universalmente para evaluar cuantitativamente la diferenciación de adipocitos

#### Detección de tejido café en humanos
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- *Imagenologia de resonancia magnetica (MRI)
- *Tomografía Computarizada de Emision de positrones
- *Ecocardiografía
- *DXA scanner* : Composicion corporal e incorporación de grasas

Estas tecnicas permiten identificación y cuantificación de tamaños de deposito de tejido adiposo

#### Interleuquinas inflamatorias (lo tienes que buscar en los resultados)
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La expansión del tejido adiposo perirenal es comúnmente descrita con variaciones en el tamaño o número de los adipocitos (Lemonnier, 1972; Parrish et al., 1990) por lo cual llama la atención no encontrar diferencias en estos parámetros entre los distintos grupos, en especial en aquellos que fueron alimentados con dieta alta en grasas. Sin embargo, hay autores que plantean que los efectos dañinos de la expansión de este depósito están relacionados también con el incremento de la liberación de adipoquinas y citoquinas proinflamatorias como leptina, interleuquina-6, interleuquina-1 y TNF-α (Grigoraș et al., 2021; Huang et al., 2020; Liu et al., 2019).

#### Diferencias por sexo
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Se han observado diferencias por sexo en la actividad lipolitica donde los **machos presentan disminución de esta**. Se observaron diferencias en la cantidad de mRNA y de proteinas de los receptores alfa,beta, beta1,2,3 con relación al sexo y tipo de dieta consumida. Importante relación de receptores alfa 2 y beta 3. (Sin autor)

#### Leptina resistina adipoquina
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##### Leptina :

La **leptina** (del griego _leptos_ delgado), también conocida como **proteína PN**, es una [adipoquina](https://es.wikipedia.org/wiki/Adipoquina "Adipoquina") producida en su mayoría por los [adipocitos](https://es.wikipedia.org/wiki/Adipocitos "Adipocitos") (células grasas) aunque también se expresa en el hipotálamo, el ovario y la placenta.

La síntesis de leptina ocurre principalmente, aunque no de forma excluyente, a nivel del [tejido adiposo](https://es.wikipedia.org/wiki/Tejido_adiposo "Tejido adiposo") blanco. Este hecho permitió proponer que la secreción de leptina actúa como señal al cerebro, informando sobre el tamaño del tejido adiposo y actuando como factor saciante. El tejido adiposo marrón o grasa parda también sintetiza leptina, aunque en menor medida. El papel de la leptina secretada en el tejido adiposo marrón no está claro, aunque podría ser únicamente un aporte extra de leptina al torrente circulatorio como reflejo del total del tejido adiposo.

La regulación de la expresión de leptina depende en gran manera de los depósitos grasos del organismo. Así, los adipocitos de mayor tamaño producen más leptina, mientras que los adipocitos de la grasa visceral secretan menos leptina que los adipocitos de la grasa subcutánea. La cantidad de triglicéridos almacenados en el adipocito es también proporcional a la cantidad de leptina producida por cada adipocito. Por esta razón, los niveles circulantes de leptina son proporcionales a la cantidad de grasa corporal.

La secreción de leptina varía de acuerdo al [ritmo circadiano](https://es.wikipedia.org/wiki/Ritmo_circadiano "Ritmo circadiano"), siendo secretada en forma pulsátil, y modulada por la [insulina](https://es.wikipedia.org/wiki/Insulina "Insulina") y otras hormonas. Su frecuencia es de aproximadamente un pulso cada 45 minutos. Su concentración aumenta paulatinamente durante el día y alcanza un pico durante la medianoche, para decrecer hasta el inicio de un nuevo ciclo. Este patrón depende también de la alimentación.

Cuando aumenta la masa de tejido adiposo más allá del punto de equilibrio, aumenta la síntesis y secreción de leptina por lo que se estimulan varios efectos compensadores en el hipotálamo:

1. Disminución del apetito por estimulación de péptidos [anorexigénicos](https://es.wikipedia.org/wiki/Anorex%C3%ADgeno "Anorexígeno") (que producen pérdida de apetito) y supresión de la producción de los péptidos orexigénicos (del griego _orexis_ que significa apetito)
2. Aumento del gasto energético elevando la tasa de metabolismo basal y la temperatura corporal, además de la modificación del punto de equilibrio hormonal para reducir la [lipogénesis](https://es.wikipedia.org/wiki/Lipog%C3%A9nesis "Lipogénesis") (producción de grasas) y aumentar la lipólisis (uso de grasa acumulada para producir energía) en el tejido adiposo.

##### Resistina :

La **resistina** es una hormona polipeptídica rica en [cisteína](https://es.wikipedia.org/wiki/Ciste%C3%ADna "Cisteína") secretada por el tejido adiposo de ratones y ratas. En los demás [mamíferos](https://es.wikipedia.org/wiki/Mam%C3%ADfero "Mamífero"), al menos en los primates, los cerdos y los perros, la resistina es secretada por células inmunes y [epiteliales](https://es.wikipedia.org/wiki/Epitelial "Epitelial"). La resistina también se conoce como CEBPE precursora de la proteína secretora rica en cisteína[1] encontrada en la zona inflamada 3 (FIZZ3), o “factor secretor específico de adipocito” (ADSF). La longitud de la resistina [pre-péptido](https://es.wikipedia.org/wiki/P%C3%A9ptido "Péptido") en el ser humano es de 108 [aminoácidos](https://es.wikipedia.org/wiki/Amino%C3%A1cidos "Aminoácidos") (en el ratón y la rata es de 114 aa); el [peso molecular](https://es.wikipedia.org/wiki/Peso_molecular "Peso molecular") es de ~12.5 kDa. Entre las proteínas sintetizadas y soltadas del tejido adiposo (adiponectina, [angiotensina](https://es.wikipedia.org/wiki/Angiotensina "Angiotensina"), [estradiol](https://es.wikipedia.org/wiki/Estradiol "Estradiol"), [IL-6](https://es.wikipedia.org/wiki/IL-6 "IL-6"), [leptina](https://es.wikipedia.org/wiki/Leptina "Leptina"), PAI-1, [TNF- α](https://es.wikipedia.org/wiki/TNF "TNF")), la resistina es una [citoquina](https://es.wikipedia.org/wiki/Citoquina "Citoquina") cuyo papel fisiológico ha sido el sujeto de mucha controversia respecto a su participación en la [obesidad](https://es.wikipedia.org/wiki/Obesidad "Obesidad") y la [diabetes mellitus tipo 2](https://es.wikipedia.org/wiki/Diabetes_mellitus_tipo_2 "Diabetes mellitus tipo 2") (T2DM).

Fue llamada "resistina" por la observada resistencia a la [insulina](https://es.wikipedia.org/wiki/Insulina "Insulina") en ratones con insulina inyectada. La resistina fue encontrada para ser producida y soltada del tejido adiposo para realizar funciones endocrinas envueltas en la resistencia a la insulina. La idea primaria proviene de estudios que demuestran que los niveles de resistina en el [suero](https://es.wikipedia.org/wiki/Suero_sangu%C3%ADneo "Suero sanguíneo") aumentan con la obesidad en numerosos modelos de sistemas (humanos, ratas, y ratones).[1](https://es.wikipedia.org/wiki/Resistina#cite_note-p30-1)​[2](https://es.wikipedia.org/wiki/Resistina#cite_note-p4-2)​[3](https://es.wikipedia.org/wiki/Resistina#cite_note-p8-3)​[4](https://es.wikipedia.org/wiki/Resistina#cite_note-p16-4)​[5](https://es.wikipedia.org/wiki/Resistina#cite_note-p19-5)​ Desde estas observaciones, investigación adicional ha relacionado la resistina a otros sistemas fisiológicos como la [inflamación](https://es.wikipedia.org/wiki/Inflamaci%C3%B3n "Inflamación") y la [homeostasis](https://es.wikipedia.org/wiki/Homeostasis "Homeostasis") energética.[6](https://es.wikipedia.org/wiki/Resistina#cite_note-p1-6)​[7](https://es.wikipedia.org/wiki/Resistina#cite_note-p31-7)​[8](https://es.wikipedia.org/wiki/Resistina#cite_note-p34-8)​

Este artículo discute la investigación actual que propone ligar la resistina a la inflamación y la homeostasis energética, incluida su presunta implicación en la resistencia a la insulina en sujetos obesos.

##### Adipoquina
Las **adipoquinas**, adipocinas o adipokinas (del griego adipo-, grasa; y -kinos, movimiento) son una serie de moléculas de señalización celular ([citokinas](https://es.wikipedia.org/wiki/Citokina "Citokina")) secretadas por el [tejido adiposo](https://es.wikipedia.org/wiki/Tejido_adiposo "Tejido adiposo"). La primera adipoquina descubierta fue la [leptina](https://es.wikipedia.org/wiki/Leptina "Leptina").[1](https://es.wikipedia.org/wiki/Adipoquina#cite_note-pmid22038756-1)​ Desde entonces, se han descrito decenas de ellas.[2](https://es.wikipedia.org/wiki/Adipoquina#cite_note-pmid22213627-2)​

Las adipoquinas son un grupo de moléculas bioactivas que juegan un papel decisivo en el desarrollo de la inflamación y la resistencia a la insulina asociadas a la obesidad.[3](https://es.wikipedia.org/wiki/Adipoquina#cite_note-Adipokines:_biological_functions_and_metabolically_healthy_obese_profile-3)​ El desequilibrio en las cantidades de adipoquinas secretadas por el tejido adiposo que ocurre durante la obesidad y el sobrepeso se ha relacionado con la patogénesis de diversas enfermedades debido a la alteración que causa en la respuesta inmune.[4](https://es.wikipedia.org/wiki/Adipoquina#cite_note-pmid21252989-4)​ De hecho, se conocen ya determinados cambios en sus patrones de expresión relacionados específicamente con la [diabetes tipo 2](https://es.wikipedia.org/wiki/Diabetes_de_tipo_2 "Diabetes de tipo 2") y las [enfermedades cardiovasculares](https://es.wikipedia.org/wiki/Enfermedades_cardiovasculares "Enfermedades cardiovasculares").[5](https://es.wikipedia.org/wiki/Adipoquina#cite_note-Adipokines_in_obesity-5)​

El tejido adiposo regula de forma dinámica y de forma endocrina, paracrina y autocrina la función de órganos tan diversos como el hipotálamo, el páncreas, el hígado, el músculo, los riñones, el endotelio o el sistema inmunitario.[6](https://es.wikipedia.org/wiki/Adipoquina#cite_note-pmid23671428-6)​ En todos los casos, la adipoquina del tejido adiposo debe unirse a los receptores de membrana localizados en las células del tejido diana.

#### Receptores beta adrenérgicos y efecto de la noradrenalina en tejido adiposo
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[Los receptores adrenérgicos de las células grasas y el control de la función de las células grasas blancas y pardas - ScienceDirect](https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0022227520376951)

Cinco subtipos de adrenoceptores están involucrados en la regulación adrenérgica de la función de las células grasas blancas y marrones.

Los efectos sobre la producción de AMPc y las respuestas celulares relacionadas con el AMPc están mediados por el control de la actividad de la adenilil ciclasa por los receptores adrenérgicos beta 1, beta 2 y beta 3 estimuladores y los adrenoceptores alfa 2 inhibidores.

La activación de los adrenoceptores alfa 1 estimula la actividad de la fosfoinositidasa C que conduce a la formación de inositol 1,4,5-trifosfato y diacilglicerol con la consiguiente movilización de las reservas intracelulares de Ca2+ y la activación de la proteína quinasa C que desencadena la capacidad de respuesta celular. El equilibrio entre los distintos subtipos de adrenoceptores es el punto de regulación que determina el efecto final de las aminas fisiológicas sobre los adipocitos in vitro e in vivo.

Existen grandes diferencias específicas de especie en la distribución de adrenoceptores de células grasas marrones y blancas y en su importancia relativa en el control de las células grasas. Los receptores adrenérgicos beta 3 funcionales coexisten con los receptores adrenérgicos beta 1 y beta 2 en varias células grasas; son débilmente activos en células grasas de cobayos, primates y humanos. Las hormonas y los transmisores fisiológicos operan, de hecho, a través del reclutamiento diferencial de todos estos receptores adrenérgicos alfa y beta múltiples sobre la base de su afinidad relativa por los diferentes subtipos. La afinidad del adrenoceptor beta 3 por las catecolaminas es menor que la de los adrenoceptores beta 1 y beta 2 clásicos. Por el contrario, la epinefrina y la norepinefrina tienen una mayor afinidad por los adrenoceptores alfa 2 que por los adrenoceptores beta 1, 2 o 3.

Existen acciones antagónicas entre los efectos mediados por los receptores adrenérgicos alfa 2 y beta en las células de grasa blanca, mientras que se ha revelado una cooperación positiva entre los receptores adrenérgicos alfa 1 y beta en las células de grasa parda. Después de la administración de aminas fisiológicas y agonistas beta se observa una regulación negativa homóloga de los adrenoceptores beta 1 y beta 2. Por el contrario, los adrenorreceptores beta 3 y alfa 2 son mucho más resistentes a la desensibilización y regulación negativa inducidas por agonistas. Se informó una regulación heteróloga de los receptores adrenérgicos beta con glucocorticoides, mientras que se demostró que las hormonas esteroides sexuales regulan la expresión de los receptores adrenérgicos alfa 2 (andrógenos) y alteran la actividad de la adenilil ciclasa (estrógenos). Después de la administración de aminas fisiológicas y agonistas beta se observa una regulación negativa homóloga de los adrenoceptores beta 1 y beta 2. Por el contrario, los adrenorreceptores beta 3 y alfa 2 son mucho más resistentes a la desensibilización y regulación negativa inducidas por agonistas. Se informó una regulación heteróloga de los receptores adrenérgicos beta con glucocorticoides, mientras que se demostró que las hormonas esteroides sexuales regulan la expresión de los receptores adrenérgicos alfa 2 (andrógenos) y alteran la actividad de la adenilil ciclasa (estrógenos). Después de la administración de aminas fisiológicas y agonistas beta se observa una regulación negativa homóloga de los adrenoceptores beta 1 y beta 2. Por el contrario, los adrenorreceptores beta 3 y alfa 2 son mucho más resistentes a la desensibilización y regulación negativa inducidas por agonistas. Se informó una regulación heteróloga de los receptores adrenérgicos beta con glucocorticoides, mientras que se demostró que las hormonas esteroides sexuales regulan la expresión de los receptores adrenérgicos alfa 2 (andrógenos) y alteran la actividad de la adenilil ciclasa (estrógenos).

#### Modificaciones epigeneticas, referencias y resultados paper diego.
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Halabi et al. 2021 Effects of gestational chronic phase shift of photoperiod on global genomic DNA methylation of perirenal white adipose tissue.

Algunas de las diferencias en el tejido adiposo blanco y marrón entre los animales CPS y LD descritos anteriormente estaban presentes antes del desafío HFD. Por lo tanto, exploramos los posibles mecanismos epigenéticos involucrados al medir el estado de metilación del ADN genómico global en los depósitos WAT y BAT en la descendencia a los 100 días. El WAT perirrenal de los descendientes de LD mostró diferencias significativas en la metilación entre el día y la noche, con niveles que eran aproximadamente un 25 % más altos durante el día ([**Figura 8A**](https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC8415792/figure/f8/)). Por el contrario, se detectaron niveles más bajos de metilación del ADN genómico global durante el día en WAT perirrenal de la descendencia de CPS (factor de tiempo × grupo: _p_ = 0,001, ANOVA bidireccional y Bonferroni). Cabe señalar que el nivel de metilación medio diurno/nocturno fue similar para el WAT perirrenal de la descendencia adulta de LD y CPS. Finalmente, no se encontraron diferencias para la metilación global del ADN en BAT, ni durante el día ni durante la noche ( _p_ = 0,948, ANOVA de dos vías;[**Figura 8B**](https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC8415792/figure/f8/)). Estas primeras diferencias en la metilación global del ADN sugieren que se ha producido una programación epigenética en WAT del grupo CPS.

De acuerdo Dohad uno de los mecanismo responsables es la modificación epigeneticas de genes através de
- *Metilizaciones
- *Modificacion de histonas
- *Remodelación de la cromatina
- *Alteración RNA no codificante*

#### Tamara Varcoe
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Desde el inicio de la gestación hasta 1 semana despues del parto.

A los 3 meses de edad, cachorros machos expuestos al programa CPS _en el útero_había aumentado la adiposidad (+29%) e hiperleptinemia (+99% a las 0700h).

#### María Serón Ferré Sheep
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Los recién nacidos LL tenían una BAT central y una temperatura de la piel más bajas en condiciones de neutralidad térmica y a 4 °C, y una concentración plasmática de norepinefrina más alta que los recién nacidos LD. En respuesta a 4°C, tuvieron una disminución pronunciada de la temperatura de la piel y no aumentaron el glicerol plasmático. El peso del BAT en los recién nacidos LL fue aproximadamente la mitad del de los recién nacidos LD._Ex vivo_ , BAT de recién nacidos LL mostró un aumento de la lipólisis basal y no respondió a NE. Además, se incrementó la expresión de genes adipogénicos/termogénicos (UCP1, ADBR3, PPARγ, PPARα, PGC1α, C/EBPβ y perilipin) y de los genes clock Bmal1, Clock y Per2. Sorprendentemente, los efectos observados en los recién nacidos LL estuvieron ausentes en los recién nacidos LL + Mel. Por lo tanto, nuestros resultados respaldan que la melatonina materna durante la gestación es importante para determinar la cantidad y la funcionalidad normal de BAT en el recién nacido.