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# System prepended metadata

title: Konjugation

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# Konjugation
## Tag 1: 
* Donor (MeroR)und Rezipient (CiproR) entsprechend der jeweiligen MHK auf die entsprechenden Selektiv-Agarplatten (LB Agar plus Anitbiotika) ausstreichen
    * Donor auf Meropenem; Rezipient auf Ciprofloxacin
    *  Bebrütung 18-24 h bei 37°C

## Tag 2:
* Herstellung einer selektiven Übernachtkultur der Stämme entsprechen der jeweiligen MHK mit 10 ml LB-Medium 
    *  Bebrütung 18-24h bei 37°C , schüttelnd 150rpm

## Tag 3:
* **Herstellen einer Vorkultur ohne Antibiotika** 
    * jeweiliger Stamm mit je 5ml LB ohne Selektionsdruck herstellen
    * Bebrütung 4h bei 37°C, schüttelnd 150rpm

* **Einstellen der optischen Dichte**
    * jeweilige Stämme auf OD 0,5 einstellen
    
* **Konjugation**
    *  Konjugation der Donatoren und Rezipienten, dabei werden diese 1:1 gemischt
        *  *Kontrollen*: 500µl Bakteriensuspension + 500µl LB-Medium
        *  *Konjugate*: 500µl Bakteriensupsension Donator + 500µl Bakteriensuspension Rezipient
    * Bebrütung 2 h bei 37°C, 


| Kontrolle | Donor 1 | Donor 2 | Rezipient 1| Rezipient 2| 
|----- | -------- | -------- | -------- | -------- |
| Konjugationen:   | Donor 1+ Rezipient 1     |Donor 2 + Rezipient 1 | Donor 1 + Rezipient 2 | Donor 2 + Rezipient 2|

* **Verdünnungsreihe und Ausplattieren**
    * Kontrollen und Konjugationen auf entsprechenden Selektionsplatten ausstreichen (je 100 µl, bei der Berechnung der cfu/ml Verdünnungsfaktor (VF) 10E1 beachten!)
        * *Positivkontrollen:* Donor auf Meropenem-LB-Platten von 10E3 - 10E5 (VF); Rezipient entsprechend auf Ciptofloxacin-LB-Platten 
        * *Negativkontrollen:* Donor 10E0 (unverdünnt) auf Ciprofloxacin-LB-Platten ; Rezipient 10E0 auf Meropenem-LB-Platten
        * *Konjugationen:* 10E0 - 10E3 Ciprofloxacin+Meropenem-LB-Platten
     + Bebrütung 18-24h bei 37°C  

## Tag 4:
*    **Auswertung**
        *  Zellzahlbestimmung in cfu/ml
