## 人體DNA粗萃取

# 第5組實驗報告
[TOC]
### 一、 實驗目的
生物課進行奇異果DNA粗萃取，想要延伸到人體的細胞。
### 二、 實驗器材
| | 項目 | 數量 |
| - |:---:|:---:|
| 1 | NaCl溶液 | 2.5 ml |
| 2 | 洗碗精 | 2.5 ml |
| 3 | 鳳梨汁 | 2.5 ml |
| 4 | 蒸餾水 | 100 ml |
| 5 | 冰酒精 | 些許 |
| 6 | 酒精 | 些許 |
| 7 | 250ml燒杯| 1個 |
| 8 | 500ml燒杯| 1個 |
| 9 | 滴管 | 1支 |
### 三、 實驗步驟
1. 取蒸餾水漱口5分鐘。
2. 取漱口液50ml 置於燒杯(*250ml*) 中。
3. 加入2.5ml 洗碗精。
4. 加入2.5ml NaCl~(aq)~。
5. 加入2.5ml 鳳梨汁。
6. 持續攪拌約8分鐘。
7. 加入等體積冰酒精。
8. 將白色濃稠物以滴管吸出，並置於酒精中。
:::info
* 實驗流程圖

cond=>condition: 萃取出DNA？
e=>end: 成果
op2=>operation: 討論分析
op=>operation: 實驗操作

st=>start: 口腔皮膜DNA粗萃取
wh=>operation: 討論問題
st->op->cond
cond(no)->wh->op
cond(yes)->op2->e

:::
### 四 實驗結果
#### 先前的奇異果粗萃取
1.奇異果汁加入洗碗精
目的:將磷脂質溶解。
原理:為界面活性劑(含有十二烷基硫酸鈉，俗稱SDS)，能破壞脂質膜，包括細胞膜及核膜，使DNA釋出。
[:mag:放大檢視](https://i.imgur.com/kvYhmrv.jpg)

2.加入食鹽水溶夜
目的:溶解DNA
原理:為常見的解釋為，鈉離子會和DNA帶輕微負電的磷酸根結合，使DNA溶於食鹽水並凝聚在一起。

[:mag:放大檢視](https://i.imgur.com/pH4bmzN.jpg)

3.加入鳳梨汁
目的:分解蛋白質以純化DNA。
原理:鳳梨汁還有鳳梨酵素，為蛋白分解酶，可分解蛋白質。

[:mag:放大檢視](https://i.imgur.com/2ZUMBPV.jpg)

4.過濾
目的:去除雜質。
注意!!隔兩層紗布。
[:mag:放大檢視](https://i.imgur.com/tAjDuCL.jpg)

5.加入冰酒精
目的:溶解細胞中脂溶性物質，並凝聚析出DNA。

6.取出DNA
用吸管、鑷子、玻棒取出介於溶夜中間層的白色懸浮物到酒精中保存
[:mag:放大檢視](https://i.imgur.com/r8ckbhu.jpg)

##### 成品!!!
[:mag:放大檢視](https://i.imgur.com/e2mW09n.jpg)

#### 人類口腔皮膜粗萃取

步驟和之前一樣，只有少了過濾

[:mag:放大檢視](https://i.imgur.com/LPKNVJ2.jpg)

[:mag:放大檢視](https://i.imgur.com/i9xoi0J.jpg)

### 五 討論

#### 1.為什麼人類口腔皮模細胞DNA較奇異果少?
>ANS:
>因為奇異果整顆都是細胞，而用漱口的方式不容易將口腔皮膜細胞刮下，故細胞較少。

#### 2.萃取出的DNA會不會參雜鳳梨DNA?
>ANS:
>會，但含量不多(低於0.5%，其他組幾乎無析出DNA)，市售的波羅(鳳梨)蛋白酶多用鳳梨的莖經壓榨、濃縮而成，可使用嫩精、木瓜汁代替。
>
#### 3.普通溫度的酒精和冰酒精有何差別?
>ANS:
>DNA為水溶性分子，不會溶於酒精等有機溶劑，故可在交界處凝聚析出。另外，酒精帶有OH-，若密度越高，隔水效果越好，DNA析出效果也會越好。而常溫下的酒精亦可做實驗，只是冰酒精會有以下幾點好處：(1)抑制核酸水解酶的活性，防止DNA降解。(2)降低分子間的運動，利於凝聚析出。(3)低溫較不會破壞DNA結構，使其斷裂。
### 六 結論
<!--簡短回應研究目的與經由本實驗而得到的論點-->
1. 口腔皮膜DNA萃取出的含量與漱口時間有關，漱口越久，細胞脫落的量就越多。
2. 萃取出的DNA中有可能帶有Pineapple的DNA，若用波蘿蛋白酶或嫩精取代，就能避免裏頭含有鳳梨DNA。
3. 實驗中亦可使用一般酒精，只是沒有冰酒精佳。
### 七 參考資料
1. 冰酒精的功用 [https://seniorbio.blogspot.com/2015/08/dna.html](https://seniorbio.blogspot.com/2015/08/dna.html)
2. 廚房實驗室遇見DNA [https://www.ntsec.edu.tw/FileAtt.ashx?id=639](https://www.ntsec.edu.tw/FileAtt.ashx?id=639)
3. DNA粗萃取 [https://www.emaze.com/@AOQCZWFZ](https://www.emaze.com/@AOQCZWFZ)
4. Bromelain [https://en.wikipedia.org/wiki/Bromelain](https://en.wikipedia.org/wiki/Bromelain)
5. Pineapple [https://en.wikipedia.org/wiki/Pineapple](https://en.wikipedia.org/wiki/Pineapple)
6. 好用的課本
### 八 隊員貢獻
| 座號 | 姓名 | 貢獻內容 | 貢獻百分比 |
| :---: | :---: | :---: |:---:|
| 2 | 方宥森 | 拍照、講台語 | 15% |
| 7 | 邱暐宸 | 主導奇異果實驗、指揮、編HackMD報告 | 45% |
| 23 | 簡恩生 | 主導口腔皮膜實驗、提供口水、編HackMD報告 | 40% |